Polymorphismes Génétiques Des Cytokines Et Le Résultat De La Candidose Invasive: Une Étude De Cohorte Prospective

Contexte Les infections à Candida causent une morbidité et une mortalité significatives chez les patients hospitalisés Bien que des facteurs cliniques et microbiologiques affectant le pronostic aient été identifiés, l’impact de la variation génétique dans les réponses immunitaires innées médiées par les cytokines sur les résultats de l’infection reste à étudier. et 351 témoins non infectés ont été génotypés pour des polymorphismes mononucléotidiques SNP dans 6 gènes de cytokines IFNG, IL10, IL12B, IL18, IL1β, IL8 et IL12RB1 du gène du récepteur des cytokines 1 L’association des SNP avec la susceptibilité à la candidémie et les résultats ont été évaluées. Les cytokines antiinflammatoires ont été mesurées in vitro dans des tests de stimulation des cellules mononucléaires du sang périphérique et dans le sérum de patients infectés. Résultats Aucun des SNP cytokines étudiés n’était associé à la susceptibilité à la candidémie Une fongémie persistante est survenue chez 13% des cas. était significativement associé à l’odds ratio [intervalle de confiance à 95%]: nutrition parentérale totale 279 [126-617], dépendance à la dialyse 376 [146-864], et les SNP IL10 rs1800896 345 [133-893] et IL12B rs41292470 536 [151- 190] La capacité de production in vitro de l’interleukine-10 et de l’interféron-γ a été influencée par ces polymorphismes, et des concentrations de cytokines pro-inflammatoires significativement plus faibles ont été mesurées dans les sérums des patients atteints de fongémie persistante. avec fongémie persistante chez les patients atteints de candidémie Ceci fournit des idées pour les stratégies de gestion ciblées futures pour les patients avec des infections sanguines Candida

La candidose invasive est une infection nosocomiale envahissante Bien que certains patients ne présentent qu’une fongémie transitoire, d’autres développent des complications comme l’endocardite, les abcès et la candidose chronique disséminée. La fongémie persistante est une complication de plus en plus reconnue de la candidémie chez 8 à 15% des patients. Peu d’études ont fourni une explication pour ces résultats différentiels, bien que la réponse immunitaire à l’infection, les comorbidités et la thérapie pharmacologique aient été suggérées pour contribuer aux résultats des patients [1] Les mécanismes immunitaires innés et adaptatifs sont importants pour la défense de l’hôte. Le système immunitaire inné constitue la première ligne de défense contre les agents pathogènes fongiques par la phagocytose et la destruction des agents pathogènes envahissants, ainsi que par l’activation de l’immunité adaptative par la présentation des antigènes et la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires [3] prote cytokines T-helper 1 Th1 cellulaires auxiliaires, telles que interféron-γ IFN-γ, et les réponses humorales Th2 qui peuvent avoir des effets anti-inflammatoires inadaptés par la libération d’interleukine IL-4 et IL-10 L’interaction entre les réponses Th1 et Th2 à l’infection à Candida est complexe mais essentiel pour la réponse à ce pathogène Des études antérieures ont démontré que des réponses vigoureuses de type Th1 sont essentielles pour l’éradication de Candida [4, 5] En revanche, les réponses de type Th2 à Candida peuvent entraîner une diminution des cytokines pro-inflammatoires. la réponse protectrice à l’infection [6] Les facteurs génétiques sont connus pour avoir un impact important sur la susceptibilité aux infections [7] Bien que beaucoup de choses aient été apprises sur les mécanismes immunitaires qui déterminent une défense efficace de l’hôte contre Candida, on en sait très peu sur le rôle joué par des polymorphismes mononucléotidiques SNP de gènes comprenant le réseau de cytokines pour la susceptibilité à la candidose systémique Cette étude a été entreprise pour estimer le rôle des polymorphismes dans les principaux gènes de la cytokine en ce qui concerne la susceptibilité à l’infection à Candida et évaluer s’il y a une association avec les résultats cliniques subséquents

Méthodes

Étudier le design

Il s’agissait d’une étude de cohorte observationnelle prospective menée au Centre Médical de l’Université de Duke et à l’Université Radboud de Nimègue. Les sujets de RUNMC ont été recrutés après accord ou dérogation éclairé par les commissions d’examen institutionnel de DUMC Durham, Caroline du Nord et RUNMC Nimègue. l’étude a été approuvée par le comité d’examen institutionnel de chaque centre d’étude, et l’inscription a eu lieu entre janvier 2003 et janvier 2009 L’étude a été réalisée conformément à la Déclaration d’Helsinki

Sujets

Dans le laboratoire de microbiologie clinique du centre participant, les adultes infectés âgés de 18 ans et plus ont été identifiés comme ayant eu des hémocultures positives pour des espèces de Candida. Les témoins non infectés recrutés à DUMC doivent avoir été hospitalisés sans antécédent de candidémie ou de candidose invasive. autres infections fongiques invasives Les contrôles non infectés au DUMC ont été recrutés dans les mêmes hôpitaux que les patients infectés afin que les comorbidités et les facteurs de risque cliniques soient aussi semblables que possible entre les groupes. Les témoins non infectés inscrits au RUNMC étaient des témoins sains non hospitalisés. si le volume de sang ou les données cliniques étaient insuffisants, des comparaisons intergroupes entre les 2 groupes de sujets non infectés et entre les 2 groupes de sujets infectés à DUMC et RUNMC ont été effectuées concernant la distribution génétique des SNP étudiés avant de poursuivre l’analyse statistique sujets non infectés

Procédures

Des échantillons de plasma, de sérum et de sang total ont été obtenus en association avec des prélèvements sanguins de routine au départ et pendant une période de suivi de 12 semaines. Des hémocultures ont été réalisées dans le cadre des soins de routine jusqu’à l’élimination de la fungémie. L’ADN a été isolé à partir de sang total par des procédures standard. Pour des tests de stimulation PBMC de cellules mononucléées de sang périphérique in vitro, du sang a été prélevé sur des volontaires sains recrutés au RUNMC.

Résultats

Présence de la candidose invasive a été déterminée sur la base de l’Organisation européenne pour la recherche et le traitement des définitions de cancer a été déterminé la mortalité toutes causes fondées sur les dossiers hospitaliers et, si nécessaire pour les sujets DUMC, la maladie Index de décès de la sécurité sociale Disseminated a été définie comme la présence des espèces de Candida dans des sites normalement stériles en dehors de la circulation sanguine à l’exclusion de l’urine et caractérisé comme fungemia persistante aiguë ou chronique a été définie comme ≥5 jours hémocultures constamment positifs pour la même espèce Candida Tous les patients infectés ont été suivis pendant 12 semaines pour évaluer pour résultat clinique

Variables prédictives

Au sein de la cohorte infectée par le DUMC, de nombreuses variables cliniques et microbiologiques de base ont été évaluées pour leur relation avec les résultats de l’étude. Ces variables incluaient l’âge, la race, le sexe et le statut d’hôte immunodéprimé.

Génotypage

La plupart des SNPs dans les régions promotrices et non traduites des gènes analysés ont été sélectionnés sur la base des associations établies précédemment avec des maladies humaines ou des effets fonctionnels connus sur la fonction protéique ou l’expression génique SNPs dans 6 gènes de cytokines IL1β, IL8, IL10, IL12B, IL18 Sequenom, LUMC Le contrôle de la qualité a été effectué en dupliquant les échantillons dans et entre les plaques et en incorporant des échantillons de contrôle positif.

Tests de stimulation des PBMC in vitro

L’isolement et la stimulation des PBMC ont été réalisés comme décrit ailleurs [8] En bref, les PBMC obtenues des individus ont été incubées à 37 ° C pendant 48 heures avec du milieu de culture ou avec Candida albicans conidia ou hyphae UC820, toutes deux 106 / mL Production de IL -10 et IFN-γ ont été mesurés dans des surnageants de PBMC par dosage immuno-enzymatique R & D Systems et Sanquin

Dosages de cytokine

Les concentrations de cytokine d’IL-6, IL-8, IFN-γ, IL-10 et IL-12p40 dans des échantillons de plasma et de sérum prélevés chez des patients infectés du jour 0 au jour 7 après hémoculture positive initiale ont été mesurées par immunofluorescence multiplex fluorescente. La technologie xMAP, Bio-Rad et un analyseur de microbilles Bio-plex Luminex selon le protocole du fabricant Le jour 0 a été défini comme la date à laquelle la première hémoculture positive a été établie

Analyses statistiques

Pour l’analyse génétique, les tests statistiques pour l’association de locus uniques et les écarts d’équilibre de Hardy-Weinberg pour tous les SNP ont été calculés à l’aide du logiciel statistique PLINK [9] d’association ont été réalisées avec une régression logistique utilisant un modèle dominant et un modèle récessif. Résumé statistique standard odds ratio [OR] et intervalle de confiance à 95% [CI] ont été rapportés pour ces tests d’association LD, D ‘et r2 [11] Les données sur la susceptibilité à l’infection ont été analysées pour les descendants blancs séparément des noirs car les fréquences alléliques devaient différer entre ces deux populations et Dans la cohorte DUMC infectée, les fréquences alléliques ont été évaluées association avec 3 résultats cliniques prédéfinis: 1 maladie disséminée, 2 fongémie persistante et 3 mortalité toutes causes confondues à 30 jours Cette analyse a été réalisée dans toute la cohorte, et la race a été considérée comme une covariable dans l’analyse Variables avec valeurs P & lt; 2 dans l’analyse univariée ou pensée cliniquement importante ont été évaluées dans des modèles de régression logistique multivariée Seules les variables ayant des valeurs P & lt; 05 ont été retenues dans les OR du modèle prédictif final et les IC 95% pour les variables restantes significatives dans le modèle multivariable final. l’analyse des concentrations de cytokines dans les dosages de stimulation des PBMC in vitro et dans le sérum / plasma des patients infectés, des tests U de Mann-Whitney ont été réalisés pour tester les différences statistiques. Tous les tests étaient bilatéraux.

RÉSULTATS

Les caractéristiques de base

Au total, 338 personnes infectées, dont 298 patients traités par DUMC, 40 patients traités par RUNMC et 351 300 patients traités par DUMC et 51 patients non infectés par RUNMC, ont été incluses. Tableau 1 Le groupe de patients blancs comprenait 237 sujets infectés et 263 sujets non infectés

Tableau 1Démographes pour le Centre médical de l’Université de Duke et l’Université de Radboud Centre médical de Nijmegen Sujets de l’étude chez l’adulte Sujets infectés démographiques n = 338,% non contrôles non infectés n = 351,% sans race Blanc 70 237 75 263 Noir 28 93 25 88 Autre 2 8 0 0 Sexe Homme 59 199 52 184 Femme 41 139 48 167 Sujets infectés démographiques n = 338,% Non Contrôles non infectés n = 351,% Aucune race Blanc 70 237 75 263 Noir 28 93 25 88 Autre 2 8 0 0 Sexe Homme 59 199 52 184 Femme 41 139 48 167 View Large Les caractéristiques cliniques des sujets infectés et non infectés du DUMC étaient similaires Tableau 2 Les espèces suivantes de Candida étaient communément identifiées dans le sang des sujets infectés: C albicans 42%, C glabrata 29%, C parapsilosis 16%, C tropicalis 13 %, C krusei 4% En résumé, 5% des sujets ont eu & gt; 1 Espèce de Candida isolée Persiste nt fungemia a été trouvé dans 13% des cas individuels La maladie disséminée a été observée dans 18% des cas infectés, et la mortalité à 30 jours était de 29%.

Tableau 2Caractéristiques du patient dans la ligne directrice pour les sujets infectés et les témoins du Centre médical de l’Université Duke, y compris les adultes blancs et noirs sujets infectés variables n = 298,% contrôles non infectés n = 300,% P Valeur âge moyen, années SD 559 168 578 164 31 État immunodéprimé & lt; 0001 HSCT 1 0 12 Transplantation d’organes solides 12 2 & lt; 0001 Malignancya active 32 20 002 Tumeur solide 23 12 Leucémie 7 5 Lymphome 4 4 ​​Chimiothérapie au cours des 3 derniers mois 17 11 03 Neutropénie ANC & lt; 500 cellules / mm3 10 4 001 VIH -infected 1 0 06 Chirurgie au cours des 30 derniers jours 43 48 25 Réception de la nutrition parentérale totale 19 4 & lt; 0001 Dépendant de la dialyse 12 7 02 Insuffisance rénale aiguë 34 22 001 Insuffisance hépatique 25 4 & lt; 0001 admis en USI au cours des 14 derniers jours 49 34 & lt ; 0001 Médiane initiale de la créatinine sérique mg / dL 13 10 001 Cellule de numération médiane des cellules leucocytaires leucocytaires / mm3 1055 855 04 Candida speciesb albicans 42 … glabr ata 29 parapsilosis 16 tropicalis 13 krusei 4 Autres espèces de Candida 3 & 1 Espèces de Candida 5 sujets infectés variables n = 298,% témoins non infectés n = 300,% P valeur âge moyen, années SD 559 168 578 164 31 état immunodéprimé 59 38 & lt ; 0001 HSCT 1 0 12 Transplantation d’organes solides 12 2 & lt; 0001 Malignancya active 32 20 002 Tumeur solide 23 12 Leucémie 7 5 Lymphome 4 4 ​​Chimiothérapie au cours des 3 derniers mois 17 11 03 Neutropénie ANC <500 cellules / mm3 10 4 001 VIH- infecté 1 0 06 Chirurgie au cours des 30 derniers jours 43 48 25 Réception de la nutrition parentérale totale 19 4 & lt; 0001 Dépendant de la dialyse 12 7 02 Insuffisance rénale aiguë 34 22 001 Insuffisance hépatique 25 4 & lt; 0001 admis en USI au cours des 14 derniers jours 49 34 & lt; 0001 Médiane initiale de la créatinine sérique mg / dL 13 10 001 Cellule de numération médiane des cellules leucocytaires / mm3 1055 855 04 Candida speciesb albicans 42 ... glabrata 29 parapsilosis 16 tropicalis 13 krusei 4 Autres espèces de Candida 3 & gt; 1 Candida species 5 Abréviations: ANC, nombre absolu de neutrophiles; VIH, virus de l'immunodéficience humaine; HSCT, greffe de cellules souches hématopoïétiques; Unité de soins intensifs, unité de soins intensifs; SD, écart-type; WBC, globules blancs de sang pourraient avoir plus d'un sujetSixteen sujets avaient & gt; 1 espèces isolées

Susceptibilité à l’infection

Tous les patients infectés et les témoins non infectés ont été génotypés avec succès pour toutes les variantes Toutes les variantes étaient dans les données HWE non montrées La comparaison intergroupe entre les contrôles non immunisés du RUNMC néerlandais et du DUMC caucasien et entre les sujets infectés recrutés à DUMC et RUNMC a révélé une distribution génétique similaire du génotype Les SNP, qui ont permis de regrouper les groupes en 1 groupe de témoins non infectés et 1 groupe de sujets infectés, n’ont pas été montrés. Les fréquences alléliques des SNP des cytokines ne différaient pas significativement entre sujets blancs infectés et non infectés Tableau 3 Des résultats similaires ont été obtenus Groupe américain, analysé séparément non représenté

Tableau 3Associations des polymorphismes dans IFNG, IL10, IL12B, IL18, IL1B, IL8 et IL12RB1 et sensibilité à la candidémie chez les adultes blancs Polymorphisme Type sauvage Hétérozygote Homozygote Mutant P Valeur IFNG rs2430561 TT TA AA 07 Non infecté,% 308 46 232 Infecté,% 234 566 20 IL10 rs1800872 GG TG TT 50 Non infecté,% 611 328 61 Infecté,% 583 353 64 IL10 rs1800896 AA GA GG 98 Non infecté,% 244 477 279 Infecté,% 272 451 276 IL12B rs41292470 SIN INS INS DEL DEL DEL 11 Non infecté,% 236 477 287 Infecté,% 248 529 222 IL12B rs3212227 AA CA CC 95 Non infecté,% 648 329 23 Infecté,% 647 310 43 IL12RB1 rs17882232 CC TC TT 34 Non infecté,% 672 282 46 Infecté,% 628 338 34 IL12RB1 rs17884858 AA GA GG 67 Non infecté,% 481 418 102 infectés,% 459 433 108 IL18 rs187238 GG GC CC 85 non infectés,% 536 359 105 infectés,% 519 413 79 IL18 rs549908 TT TG GG 78 non infectés,% 481 401 118 infectés,% 492 41 98 IL1B rs1143634 GG GA AA 85 Non infecté,% 599 336 65 Infecté,% 605 361 34 IL1B rs16944 AA GA GG 42 Non infecté,% 1595 455 385 Infecté,% 115 466 419 IL8 rs4073 AA TA TT 86 Non infecté 18 54 279 Infecté 199 511 29 Polymorphisme Type sauvage Hétérozygote Mutant homozygote P Valeur IFNG rs2430561 TT TA AA 07 Non infecté,% 308 46 232 Infecté,% 234 566 20 IL10 rs1800872 GG TG TT 50 Non infecté,% 611 328 61 Infecté,% 583 353 64 IL10 rs1800896 AA GA GG 98 Non infecté,% 244 477 279 Infecté,% 272 451 276 IL12B rs41292470 INS INS INS DEL DEL DEL 11 Non infecté,% 236 477 287 Infecté,% 248 529 222 IL12B rs3212227 AA CA CC 95 Non infecté,% 648 329 23 Infecté,% 647 310 43 IL12RB1 rs17882232 CC TC TT 34 Non infecté,% 672 282 46 Infecté,% 628 338 34 IL12RB1 rs17884858 AA GA GG 67 Non infecté,% 481 418 102 Infecté,% 459 433 108 IL18 rs187238 GG GC CC 85 Non infecté,% 536 359 105 Infecté,% 519 413 79 IL18 rs549908 TT TG GG 78 Non infecté,% 481 401 118 Infecté,% 492 41 98 IL1B rs1143634 GG GA AA 85 Non infecté,% 599 336 65 Infecté,% 605 361 34 IL1B rs16944 AA GA GG 42 Non infecté,% 1595 455 385 Infecté, % 1 15 466 419 IL8 rs4073 AA TA TT 86 Non infecté 18 54 279 Infecté 199 511 29 aComprend 245 sujets infectés et 263 sujets non infectésVue De même, aucune association entre les polymorphismes des cytokines et la susceptibilité aux infections sanguines à Candida n’a été observée dans la cohorte noire. les SNP de cytokines étudiés étaient associés à la susceptibilité à la candidémie

Tableau 4Associations des polymorphismes dans IFNG, IL10, IL12B, IL18, IL1B, IL8 et IL12RB1 et sensibilité à la candidémie chez les adultes noirs Polymorphisme sauvage Type hétérozygote Mutant homozygote P Valeur IFNG rs2430561 TT TA AA 12 Non infecté,% 693 250 57 infecté,% 569 409 215 IL10 rs1800872 GG TG TT 23 Non infecté,% 414 379 207 Infecté,% 333 473 194 IL10 rs1800896 AA GA GG 52 Non infecté,% 471 425 103 Infecté,% 419 473 108 IL12B rs41292470 SIN INS. DEL DEL DEL 45 Non infecté,% 171 489 341 Infecté,% 129 452 419 IL12B rs3212227 AA CA CC 11 Non infecté,% 375 477 148 Infecté,% 505 376 118 IL12RB1 rs17882232 CC TC TT 67 Non infecté,% 689 276 35 Infecté,% 667 290 43 IL12RB1 rs17884858 AA GA GG 74 Non infecté,% 777 223 0 infecté,% 758 209 33 IL18 rs187238 GG GC CC 11 Non infecté,% 694 271 35 infecté,% 593 309 99 IL18 rs549908 TT TG GG 39 Non infecté,% 628 349 23 Infecté,% 669 376 65 IL1B rs1143634 GG GA AA 23 Non infecté,% 736 229 35 Infecté,% 656 312 32 IL1B rs16944 AA GA GG 13 Non infecté,% 221 488 291 Infecté,% 318 385 297 IL8 rs4073 AA TA TT 66 Non infecté,% 565 365 71 Infecté,% 602 322 75 Polymorphisme Type sauvage Mutant homozygote homozygote P Valeur IFNG rs2430561 TT TA AA 12 Non infecté,% 693 250 57 infecté,% 569 409 215 IL10 rs1800872 GG TG TT 23 Non infecté,% 414 379 207 Infecté,% 333 473 194 IL10 rs1800896 AA GA GG 52 Non infecté ,% 471 425 103 Infecté,% 419 473 108 IL12B rs41292470 SIN. INS. INDE DEL DEL 45 Non infecté,% 171 489 341 Infecté,% 129 452 419 IL12B rs3212227 AA CA CC 11 Non infecté,% 375 477 148 Infecté,% 505 376 118 IL12RB1 rs17882232 CC TC TT 67 Non infecté,% 689 276 35 Infecté,% 667 290 43 IL12RB1 rs17884858 AA GA GG 74 Non infecté,% 777 223 0 Infecté,% 758 209 33 IL18 rs187238 GG GC CC 11 Non infecté,% 694 271 35 Infecté,% 593 309 99 IL18 rs549908 TT TG GG 39 Non infecté,% 628 349 23 Infecté,% 669 376 65 IL1B rs1143634 GG GA AA 23 Non infecté,% 736 229 35 Infecté,% 656 312 32 IL1B rs16944 AA GA GG 13 Non infecté,% 221 488 291 Infecté, % 318 385 297 IL8 rs4073 AA TA TT 66 Non infecté,% 565 365 71 Infecté,% 602 322 75 aInclus 93 sujets infectés et 88 sujets non infectésVoir Grand

Analyse univariée des résultats cliniques

Dans la cohorte infectée par le DUMC, les variables significativement associées à la fongémie persistante en analyse univariée comprenaient le statut immunodéprimé, la réception de TPN et l’infection par C parapsilose. Les polymorphismes des gènes IL10 et IL12B étaient associés à une fongémie persistante à l’aide d’une analyse univariée. un modèle récessif Tableau 5 En revanche, aucune association n’a été observée entre les polymorphismes dans les gènes de cytokines et les maladies disséminées ou les données sur la mortalité à 30 jours non montrées.

Tableau 5Analyse à une variable des facteurs cliniques, microbiologiques et génétiques associés à la fongémie persistante chez 298 adultes infectés du centre médical de l’Université de Dua Variable Non persistant,% n = 259 Persistant,% n = 39 P Valeur Sexe féminin 423 45 71 Immunocompromis 568 769 02 HSCT 01 25 31 Transplantation d’organes solides 109 175 23 Malignité activeb 318 275 59 Tumeur solide 225 15 28 Leucémie 66 75 74 Lymphome 27 100 05 Chimiothérapie au cours des 3 derniers mois 159 225 29 Neutropénie ANC <500 cellules / mm3 93 15 26 VIH-infectée 16 0 100 Chirurgie au cours des 30 derniers jours 432 450 83 Réception de l'alimentation parentérale totale 170 325 02 Dépendance à la dialyse 107 231 02 Insuffisance rénale aiguë 346 325 79 Insuffisance hépatique 245 275 69 Admission à l'USI au cours des 14 derniers jours 502 475 75 Candida species albicans 430 350 34 glabrata 295 275 80 parapsilose 140 275 03 tropicalis 124 150 65 krusei 35 5 64 Autres espèces de Candida 35 0 61 & gt; 1 Espèce de Candida 51 75 46 Bactériémie dans les 48 heures 248 175 31 Bactériémie dans les 14 jours 349 275 36 IFNG rs2430561 AA 122 125 100 IL10 rs1800872 TT 109 50 39 IL10 rs1800896 AA 348 175 03 IL12B rs41292470 INS / INS 243 77 02 IL12B rs3212227 CC 75 26 49 IL12RB1 rs17882232 TT 28 125 01 IL12RB1 rs17884858 GG 76 128 34 IL18 rs187238 CC 430 474 62 IL18 rs549908 GG 78 77 100 IL1B rs1143634 AA 47 0 38 IL1B rs16944 AA 206 125 29 IL8 rs4073 AA 324 385 44 Variable Non persistant,% n = 259 Persistant,% n = 39 P Valeur Sexe féminin 423 45 71 Immunocompromis 568 769 02 HSCT 01 25 31 Transplantation d'organes solides 109 175 23 Malignité activeb 318 275 59 Tumeur solide 225 15 28 Leucémie 66 75 74 Lymphome 27 100 05 Chimiothérapie au cours des 3 derniers mois 159 225 29 Neutropénie ANC <500 cellules / mm3 93 15 26 Infection par le VIH 16 0 100 Chirurgie dans le passé 30 jours 432 450 83 Réception de l'alimentation parentérale totale 170 325 02 Dépendance à la dialyse 107 231 02 Insuffisance rénale aiguë 346 325 79 Insuffisance hépatique 245 275 69 Admission à l'USI au cours des 14 derniers jours 502 475 75 Candida species albicans 430 350 34 glabrata 295 275 80 parapsilose 140 275 03 tropicalis 124 150 65 krusei 35 5 64 Autres espèces de Candida 35 0 61 & gt; 1 Espèce de Candida 51 75 46 Bactériémie dans les 48 heures 248 175 31 Bactériémie dans les 14 jours 349 275 36 IFNG rs2430561 AA 122 125 100 IL10 rs1800872 TT 109 50 39 IL10 rs1800896 AA 348 175 03 IL12B rs41292470 INS / INS 243 77 02 IL12B rs3212227 CC 75 26 49 IL12RB1 rs17882232 TT 28 125 01 IL12RB1 rs17884858 GG 76 128 34 IL18 rs187238 CC 430 474 62 IL18 rs549908 GG 78 77 100 IL1B rs1143634 AA 47 0 38 IL1B rs16944 AA 206 125 29 IL8 rs4073 AA 324 385 44 Abréviations: ANC, absol le nombre de neutrophiles; VIH, virus de l'immunodéficience humaine; HSCT, greffe de cellules souches hématopoïétiques; Unité de soins intensifs, unités de soins intensifs avec P & lt; 2 ont été évalués plus en analyse multivariéeb Certains patients ont eu & gt; 1 malignité activeView Large

Analyse de régression logistique multivariée de la fongémie persistante

Dans le modèle multivarié, les variables suivantes ont été analysées dans le modèle de régression logistique et significativement associées à la candidémie persistante OR [95% CI]: TPN 279 [126-617], dépendance à la dialyse 376 [146-864], et les SNP suivants : IL10 rs1800896 GG ou GA vs AA, 345 [133-893] et IL12B rs41292470 INS / DEL ou DEL / DEL vs INS / INS, 536 [151-190]

Production de cytokines in vitro par les PBMC

La stimulation des PBMC obtenues chez des individus sains porteurs de différents génotypes IL10 rs1800896 avec C albicans conidia ou C albicans hyphae pendant 48 heures a révélé une production accrue d’IL-10 lors de la stimulation par C albicans conidia dans les PBMC d’individus homozygotes pour l’allèle ILs rs1800896 G, avec des PBMC provenant d’individus homozygotes pour l’allèle A Les individus hétérozygotes pour ce polymorphisme présentaient une production intermédiaire d’IL-10 La capacité de production des PBMC après stimulation avec des albhales C albicans était très faible et ne révélait aucune différence entre génotypes Figure 1A Quand les PBMC étaient stimulées avec ces mêmes stimuli et ont été stratifiés pour leur génotype IL12B rs41292470, une production multipliée par 3 d’IFN-γ a été observée par les PBMC homozygotes pour l’allèle d’insertion, comparativement aux PBMC des individus homozygotes pour l’allèle de délétion IL12B lors de la stimulation avec des hyphae albicans C mais pas conidia Encore, les PBMC des individus hétérozygotes pr quantités intermédiaires d’IFN-γ Figure 1B

Figure 1View grandDownload polymorphismes slide10 et IL12B et réponses cytokines induites par Candida A, capacité de production cytokine de IL-10 interleukine des cellules mononucléaires du sang périphérique PBMC provenant d’individus sains avec différents génotypes IL10 rs1800896, non stimulés ou stimulés avec 106 / mL albicans conidies C ou 106 / mL d’albicans hyphae C pendant 48 heures Les données sont moyennes ± erreur standard de moyenne SEM B, Cytokine capacité de production de interféron-γ IFN-γ des PBMC provenant d’individus sains avec différents génotypes IL12B rs41292470, non stimulés ou stimulés avec 106 / mL C albicans conidia ou 106 / mL albicans hyphae C pendant 48 heures Les données sont moyennes ± SEMFigure 1Voir grandDownload lipIL10 et IL12B polymorphismes et réponses cytokines induites par Candida A, capacité de production de Cytokine de IL-10 interleukine des cellules mononucléaires du sang périphérique PBMCs d’individus en bonne santé avec différents Génotypes IL10 rs1800896, non stimulés ou stimulés avec 106 / mL de albicans C coni dia ou 106 / mL d’albicans hyphae C pendant 48 heures Les données sont moyennes ± erreur standard de moyenne SEM B, Cytokine capacité de production d’interféron-γ IFN-γ de PBMC provenant d’individus sains avec différents génotypes IL12B rs41292470, non stimulés ou stimulés soit 106 / mL c albicans conidies ou 106 / mL albicans hyphae C pendant 48 heures Les données sont moyennes ± SEM

Concentrations de cytokines circulantes

Des concentrations plus faibles de cytokines pro-inflammatoires IFN-γ, IL-8, IL-6 étaient observées dans le sérum / plasma chez les patients présentant une fongémie persistante, comparativement aux patients ayant rapidement éliminé Candida alors que les différences étaient statistiquement significatives pour l’IFN-γ et l’IL-8. les différences dans les concentrations circulantes d’IL-6 n’étaient pas statistiquement significatives Tableau 6, test U de Mann-Whitney

Tableau 6 Concentrations de cytokine IFN-γ, IL-6 et IL-8 dans les échantillons de plasma et de sérum obtenus chez les patients infectés du jour 0 au jour 2 après culture sanguine positive initiale Pas de fongémie persistante Fungemia persistante Non Moyenne IC 95% Non Moyenne 95% CI P Valuea IFN-γ pg / mL Jours 0-1 75 359 103-615 11 48 20-77 01 Jours 0-2 112 399 105-694 16 43 19-66 01 IL-6 pg / mL Jours 0-1 75 1174 581-1768 11 554 137-970 08 Jours 0-2 112 1296 498-2094 16 523 25-1021 09 IL-8 pg / mL Jours 0-1 75 1007 421-1594 11 299 72-527 02 Jours 0-2 112 1109 408-1811 16 252 97-408 01 Non Fongémie persistante Fongémie persistante Non Moyenne 95% CI Non Moyenne 95% IC P Valuea IFN-γ pg / mL Jours 0-1 75 359 103-615 11 48 20-77 01 Jours 0-2 112 399 105-694 16 43 19-66 01 IL-6 pg / ml Jours 0-1 75 1174 581-1768 11 554 137-970 08 Jours 0-2 112 1296 498-2094 16 523 25-1021 09 IL-8 pg / mL Jours 0-1 75 1007 421-1594 11 299 72-527 02 Jours 0-2 112 1109 408-1811 16 252 97-408 01 Abréviations: IC, intervalle de confiance; IFN-y, interféron-y; IL, interleukinaMann-Whitney U testView

DISCUSSION

-12 est constitué de 2 sous-unités, p35 et p40, codées respectivement par IL12A et IL12B. Dans des études antérieures, il a été démontré que la présence de ce SNP IL12B dans la région promotrice du gène s’accompagne d’une production plus élevée d’IL-12. et IFN-γ [20] Dans la présente étude, nous démontrons qu’un polymorphisme insertion / délétion dans la région promotrice de IL12B influe sur la probabilité de développer une infection persistante avec Candida Tandis que l’effet du polymorphisme du promoteur IL12B sur l’expression IL-12 Des études antérieures ont suggéré que les cellules dendritiques d’individus porteurs de l’allèle d’insertion IL12B produisaient les plus fortes quantités d’IL-12 lors de la stimulation [21] Cet allèle IL12B s’est avéré complexe et la sécrétion de cette cytokine in vivo peut être influencée par plusieurs facteurs. également pour protéger contre la candidémie persistante dans notre étude, et cela est en ligne avec les effets bénéfiques de réponses améliorées IL-12 / Th1 dans les infections fongiquesEn revanche, IL-10 contre équilibre les effets des cytokines pro-inflammatoires, y compris IFN-γ Le SNP IL10 à -1082 G à A modifie la sécrétion d’IL-10 et peut influencer le résultat dans plusieurs états pathologiques [22] Le SNP IL10 -1082 G / A se situe dans un ETS- site de liaison consensuel et est associé à un allèle avec une production d’IL-10 inférieure [23, 24] Par conséquent, le SNP IL10 -1082 peut modifier la réponse à la septicémie causée par une variété de micro-organismes [25] à la position -1082 était également associée à un taux plus élevé de persistance de l’infection, et dans d’autres études, les individus porteurs de l’allèle G présentaient une production d’IL-10 plus élevée [26] Dans la présente étude, ce même allèle G est également associé à probabilité de développer une fongémie persistante, ce qui implique qu’une forte production d’IL-10 est prédisposante à une candidémie prolongée. Les résultats des essais de stimulation PBMC in vitro supportent les associations des polymorphismes IL10 et IL12B avec une fongémie persistante. il a été démontré que l’allèle et l’allèle IL12B DEL, qui augmentent tous deux le risque de fongémie persistante, modulent les réponses cytokiniques des PBMC provenant de volontaires sains lorsqu’elles sont stimulées par des conidies ou des hyphes de type C albicans; l’allèle IL10 G est associé à une production plus élevée d’IL-10 par les PBMC lorsqu’elles sont stimulées par des conidies C albicans, tandis que l’allèle IL12B DEL diminue la production d’IFN-γ spécifiquement lors de la stimulation par des hyphae C albicans, des concentrations détectables d’IL- 10 et IL-12 n’ont pu être mesurés dans les échantillons sériques de nos patients, mais nos résultats sont corroborés par notre analyse d’autres cytokines circulantes, qui démontrent des réponses cytokines très faibles IFN-γ et IL-8 chez les patients atteints de fongémie persistante. Il n’a pas été démontré que les concentrations de ces cytokines circulantes étaient directement liées aux polymorphismes IL12B et IL10 dans notre cohorte, probablement en raison du nombre relativement faible de sujets chez lesquels les cytokines pouvaient être mesurées. indirectement supporté par l’observation antérieure selon laquelle les réponses Th2 / IL-10 contrebalancées sont délétères chez les patients En outre, il existe un ensemble de preuves que le traitement des patients atteints d’infections invasives Candida [28] ou Aspergillus [29] avec des cytokines pro-inflammatoires recombinantes telles que IFN-γ, granulocyte macrophage colony-stimulating facteur CSF, ou le CSF granulocytaire, a des effets bénéfiques sur le résultat des infections fongiques systémiquesAutres gènes étudiés IL1β, IL8, IL10, IL18, IFNG, IL12RB1 n’a pas révélé d’effets significatifs sur la sensibilité aux infections systémiques à Candida ou la gravité de la maladie En ligne avec ce manque d’effet au niveau génétique, la production de cytokines dans les dosages de stimulation des PBMC in vitro et les concentrations circulantes d’IFN-γ, d’IL-6 et d’IL-8 n’ont pas été influencées par la présence de ces polymorphismes non illustrés par l’association des polymorphismes IL10 et IL12B, cette étude a également révélé l’association de la fongémie persistante avec la nutrition parentérale totale et la dépendance à la dialyse, ce qui est compatible avec pr études évocatrices [30] La fongémie persistante est une complication de plus en plus reconnue des infections à Candida et a été rapportée chez 8% à 15% des patients candidats dans des essais cliniques randomisés contrôlés. En conclusion, nous démontrons que les polymorphismes des gènes modulent Th1 / Th2 réponses IL12B et IL10 influencent la probabilité de persistance systémique de l’infection à Candida dans une grande cohorte de patients Cette étude fournit, à notre connaissance, les premiers marqueurs génétiques qui peuvent être utilisés pour prédire une évolution prolongée de la maladie et qui doivent être confirmés dans de futures études En outre, l’association de faibles réponses Th1 avec des résultats défavorables de l’infection fournissent des arguments supplémentaires pour l’immunothérapie adjuvante avec IFN-γ recombinant dans les infections à Candida systémiques

Remarques

Contributions des auteurs

TSP, E vd V, DK et MO ont effectué les expériences SND V et DK sélectionnés SNK et conçu les tests de génotypage MDJ, PBS, BDA, JCY, GML, JRP et MGN géré la collecte de la cohorte MDJ, DRVE, et WKS a réalisé l’analyse statistique clinique TSP, MDJ, JRP, TW et MGN a conçu l’étude et a écrit le manuscrit Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final

Aide financière

Ce travail a été soutenu par une subvention Vici de l’Organisation néerlandaise pour la recherche scientifique au MGN, et les Instituts nationaux de la santé accorde AI-51537 à MDJ et AI-73896 à JRP Tous les auteurs ont un accès complet à toutes les données de l’étude et prennent la responsabilité de l’intégrité des données et de l’exactitude de l’analyse des données

Conflits d’intérêts potentiels

Tous les auteurs: Aucun conflit rapporté Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels Conflits que les éditeurs considèrent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués