Résultats dermatologiques dans les générations d’une famille présentant une forte prévalence de l’infection par le type de virus lymphotrope des lymphocytes T humains au Brésil

Contexte Les manifestations dermatologiques sont assez fréquentes chez les patients atteints de leucémie et de lymphome des cellules T adultes et chez les patients atteints de myélopathie et / ou de paraparésie spastique tropicale associée au virus lymphotrope des lymphocytes T humains HTLV – Le but de cette étude était d’étudier les résultats dermatologiques. Les sujets ont subi un examen dermatologique et une évaluation en laboratoire, qui comprenait la recherche du génome HTLV dans les cellules mononucléaires du sang périphérique PBMCs par qualitatif et semi-quantitatif Nous avons trouvé que les cas d’altérations dermatologiques xérotiques, y compris les cas d’ichtyose acquise, étaient plus fréquents chez les patients infectés vs aucun chez les individus non infectés; P = Autres lésions observées dans ce groupe: impétigo, gale, névus épidermique, herpès zoster, rosacée et acné juvénile. Un individu infecté par HTLV présentait une ichtyose concomitante, un impétigo, une gale, une dermatophytose et une dermatite séborrhéique. Les PBMC et les échantillons de peau des patients ont confirmé les résultats sérologiques dans tous les cas. En outre, la charge provulsale HTLV était plus élevée chez les patients avec & gt; lésion cutanée Enfin, le test HTLV- a pu être identifié dans la peau par immunofluorescence, qui, par l’utilisation de la PCR en tant qu’étalon-or, a montré une sensibilité et une spécificité de% et de%, respectivement. tropisme vers la peau, même chez les porteurs de HTLV sans leucémie / lymphome des cellules T adultes ou myélopathie associée au HTLV et / ou paraparésie spastique tropicale

Le virus lymphotrope humain de type T a été décrit au début des années et affecte actuellement plusieurs millions de personnes dans le monde. Le virus est endémique au Japon, aux Caraïbes, en Mélanésie, en Afrique et en Amérique du Sud HTLV- et à l’enfant principalement par l’allaitement maternel, par le partage de seringues, sexuellement, et par transfusion sanguine Peu après sa description, HTLV- a été considéré comme l’agent étiologique de la leucémie et lymphome des cellules T adultes ATLL , HTLV– myélopathie associée / paraparésie spastique tropicale HAM / TSP , et uvéite associée au HTLV De plus, les rapports publiés au début montrent une forte association en Jamaïque entre le HTLV et l’eczéma infantile sévère, connu sous le nom de «dermatite infectieuse» Une dermatite infectieuse a également été signalée dans d’autres pays, notamment au Brésil, au Pérou et au Japon. Certaines affections associées à l’infection par le HTLV sont l’arthrite chronique, la strongyloïdose récurrente et / ou sévère, la réduction de réaction cutanée tardive et gale sévère Des altérations dermatologiques autres que la dermatite infectieuse ont été décrites chez des patients infectés par HTLV-, notamment chez ceux ATLL ou HAM / TSP Chez les patients ATLL, prédominance de maculopapular et lésions nodulaires, alors que la xérodermie et l’ichtyose acquise sont les principaux résultats dermatologiques associés à HAM / TSP La fréquence des lésions cutanées chez les porteurs HTLV est inconnue, bien que certains cas ont été décrits [,,] En outre, certains rapports suggèrent que HTLV- Les sujets infectés présentant des lésions cutanées présentent un risque plus élevé de développer un ATLL ou un HAM / TSP que ceux qui n’ont pas de lésions cutanées Le but de cette étude était d’étudier les résultats épidémiologiques, dermatologiques et de laboratoire d’une famille brésilienne. forte prévalence de l’infection à HTLV

Sujets et méthodes

scence IF dosage Ensuite, les échantillons ont été préparés conformément aux recommandations standard Les spécimens pour les études anatomopathologiques ont été inclus; Ils ont ensuite été conservés à température ambiante. Ensuite, ils ont été colorés à l’hématoxyline-éosine avant d’être analysés au microscope optique. Les échantillons de biologie moléculaire et d’anticorps ont été conservés au congélateur à: – PCR CN. Spécifique aux PBMC HTLV dans les PBMC et spécimens de biopsie cutanée La PCR nested spécifique au gène HTLV-env a été utilisée pour étudier la présence du génome proviral HTLV et pour confirmer le type de virus dans les PBMC et dans les échantillons de biopsie cutanée. Les sujets, y compris ceux qui se sont révélés être séronégatifs pour les PBMC HTLV, ont été isolés par centrifugation en gradient de densité et l’ADN a été extrait en utilisant DNAzol Reagent Invitrogen conformément aux recommandations du fabricant. L’ADN des échantillons de biopsie cutanée a été obtenu par digestion décrit ailleurs Un microgramme d’ADN génomique de PBMC ou de peau a été utilisé comme cible dans une réaction de μL conta mmol / L de Tris-HCl pH, mmol / 1 de KCl, mmol / 1 de MgCl, mmol / 1 de chaque désoxyribonucléoside triphosphate, U de Taq polymérase Invitrogen, et pmol d’amorces SK ‘-CTAGTCGACGCTCCAGGATATGACC-‘ et SK ‘-CAGACCGCCACCGGTACCGCTCGGC-‘ La PCR a été effectuée en utilisant un thermocycleur PTC-; MJ Recherche avec des cycles pour s à ° C, s à ° C, et min à ° C et une période d’extension finale de min à ° C Deux microlitres de ce premier produit PCR ont été utilisés comme cible pour un second cycle d’amplification, sous les mêmes conditions réactives et avec les amorces ENV-IF ‘-TCCTTAATACCGAACCCAGCCAACTG-‘ et ENV-IR ‘-GGTCAAAGCAGTGGGTCCAGTTAAAT-‘ Les conditions thermiques étaient des cycles pour s à ° C, s à ° C, et min à ° C, avec une extension finale. Le produit amplifié bp a été soumis à électrophorèse sur un gel d’agarose% coloré au bromure d’éthidium et visualisé à la lumière UV. Mesure de la charge provulsale HTLV dans les PBMCs La charge HTLV-provirale dans les PBMC a été semi-complétée par analyse densitométrique. Le nombre de copies provirales et le nombre de cellules ont été mesurés par PCR spécifique à la région HTLV-env et au gène humain β-actine. Nous avons considéré que μg d’ADN correspondait à × PBMC, donc l’ADN était dilué pour contenir x cellules dans un volume -μL , qui ch a été utilisé pour amplifier HTLV-env et le gène β-actine dans différents tubes de réaction PCR amplification a été faite en utilisant μL d’ADN dans un volume de -μL contenant mmol / L Tris-HCl pH, mmol / L KCl, mmol / L MgCl , umol / L de désoxynucléoside triphosphates, U Taq ADN polymérase Invitrogen, et pmol d’amorces SK et SK Quarante cycles pour s à ° C, s à ° C et min à ° C ont été réalisés dans un thermocycleur PTC-; L’amplification de la β-actine par PCR de MJ Research a été réalisée en utilisant μL d’ADN dans un volume de -μL contenant mmol / L pH Tris-HCl, mmol / L KCl, mmol / L MgCl, μmol / L désoxynucléoside triphosphates, U Taq ADN polymérase Invitrogen, et pmol des amorces actine- ‘-TCACCCACACTGTGCCCATCTACGA-‘; positions nucléotidiques, – et actine- ‘-CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG-‘; positions des nucléotides, – Vingt-cinq cycles pour s en ° C, s en ° C et s en ° C ont été effectués dans un thermocycleur PTC-; MJ Research Une aliquote de μL de β-actine bp et de μL de produits amplifiés env bp a été soumise à électrophorèse sur un gel d’agarose% coloré au bromure d’éthidium, et l’image visualisée avec de la lumière UV a été capturée par ImageMaster VDS Amersham en utilisant la version du logiciel TotalLab Amersham Standard courbe aux copies provirales a été généré en utilisant des dilutions en série de l’ADN de MT, une lignée lymphocytaire humaine infectée par HTLV, pour représenter ×, ×, ×, et des copies de l’ADN HTLV dilutions utilisées représentées ×,,,, et les cellules Nous avons supposé que chaque cellule MT contient des copies de env et que chaque PBMC a des copies de l’identification β-actine geneHTLV- en utilisant un anticorps monoclonal fluorescent anti-p Chaque échantillon de peau a été pressé entre une paire de lames de verre pour obtenir une empreinte pour le dosage IF en utilisant un anticorps monoclonal anti-anticorps monoclonal anti-p; contenant AP AP conjuguée, isothiocyanate de fluorescéine et IgG de chèvre anti-souris Les procédures techniques appliquées dans le test IF ont été publiées ailleurs Fait important, l’interprétation des résultats de cet examen a été faite sans connaissance des résultats sérologiques MT cellules et Les cellules cutanées d’un individu HTLV – négatif non apparenté à la famille étudiée ont été utilisées comme témoins positifs et négatifs, respectivement. Analyse statistique Toutes les données ont été enregistrées dans une base de données spécialement conçue pour cette étude. test, le cas échéant, des tests bilatéraux ont été utilisés, et P & lt; a été considéré comme statistiquement significatif. Les calculs ont été effectués à l’aide du programme statistique EpiInfo Centres for Disease Control and Prevention

Résultats

HTLV- transmission parmi les membres de la famille Parmi les individus évalués,% étaient HTLV-séropositifs; étaient des femmes et étaient des hommes Cette distribution par sexe suggérait une corrélation significative entre l’infection par le HTLV et le sexe féminin [%] vs [%] de; Les variables épidémiologiques, telles que l’âge, et les différents facteurs de risque d’infection à HTLV acquise n’ont montré aucune différence statistique entre les porteurs de HTLV et les sujets séronégatifs. L’allaitement était le mode le plus courant de transmission du HTLV entre les membres de la famille. Il est intéressant de noter que tous les cas d’infection à HTLV observés chez les membres de la troisième génération se sont produits chez des sujets féminins. Malgré une charge provirale élevée avec HAM / TSP, le cas index II- n’avait pas transmis le virus à sa femme

Figure Vue largeTélécharger diapositive ichtyose acquise observée dans les jambes d’un individu participant infecté par le type de virus lymphotrope des cellules T humaines Figure Vue largeTélécharger diapositive ichtyose acquise observée dans les jambes d’un individu participant infecté par le type de virus lymphotrope T humain

Tableau View largeTélécharger la diapositive Données épidémiologiques des membres de la famille, avec comparaison des sujets infectés et non infectésTable Voir grandDownload slideDonnées épidémiologiques des membres de la famille, avec comparaison des sujets infectés et non infectés

Figure AgrandirVersion de la famille d’étude montrant la forte prévalence de l’infection par le virus lymphotrope des lymphocytes T humains et distribution du virus chez les parentsFigure View largeTélécharger diapositive de la famille d’étude montrant la prévalence élevée de l’infection par le virus lymphotrope des cellules T humaines HTLV- et virus distribution chez les parentsDermatologiques Plus d ‘une lésion cutanée a été observée chez certains individus, ce qui n’a rien à voir avec leur statut sérologique. Néanmoins, les altérations dermatologiques liées à la xérose étaient nettement plus fréquentes dans le groupe infecté par le HTLV; L’un de ces patients avait des diagnostics concomitants d’ichtyose, de gale classique, d’impétigo, de dermatite tachycardique et de dermatite séborrhéique. Parmi les patients atteints d’ichtyose, les patients atteints d’ichtyose étaient modérés et présentaient de graves lésions cutanées. En ce qui concerne les patients atteints de xérose cutanée, outre le diagnostic clair qu’ils ont reçu après l’examen physique, ils ont signalé la nécessité d’utiliser des produits hydratants quotidiens, indépendamment des conditions environnementales, par exemple la température Aucun des patients du groupe non infecté Des altérations dermatologiques ont également été observées chez des sujets non infectés, y compris des patients atteints de Tinea pedis, pitiriasis versicolor, excoriations névrotiques. , hache Trichomycose d’illary, gale, acné conglobata, et hyperkératose plantaire Globalement, des individus sans lésion dermatologique ont été testés négatifs pour les anticorps anti-HTLV, mais cette observation n’a pas atteint la signification statistique P = HTLV- charge provirale PCR nested pour le gène HTLV-env Les PBMC provenant des sujets ont confirmé les résultats des tests sérologiques et le type de virus. La charge provirale HTLV des sujets a montré des valeurs dans une fourchette de% à% tableau La charge provirale moyenne était%, et la médiane était% Une charge provirale supérieure correspondait à plus résultats anormaux de l’examen dermatologique, et comme prévu, les individus HAM / TSP et dans le tableau Tableau individuel, qui a présenté une charge provirale de% au moment de la collecte des échantillons Mars, a eu des résultats normaux d’évaluations dermatologiques et neurologiques Cependant, elle a développé HAM / TSP des années plus tard

Tableau View largeTélécharger DiapositiveType de virus lymphotrope des cellules T humainesHuman charge HTLV-provirale dans les PBMC et résultats cliniques pour les membres de la familleTable View largeTélécharger DiapositiveHuman T lymphotrope viral type HTLV-provirale charge dans les PBMCs et les résultats cliniques pour les membres de la familleHistological dans les échantillons de peau PCR pour le HTLV- Le gène env a été réalisé dans des échantillons cutanés de patients, dont% avaient des résultats sérologiques réactifs pour le HTLV. Comme dans les PBMC, la PCR nichée pour le gène env dans les échantillons de peau a confirmé les résultats sérologiques dans tous les échantillons testés. analysés par un examen histologique conventionnel, les patients étaient séropositifs et étaient séronégatifs. Les résultats histologiques étaient essentiellement sans particularité. Seuls les spécimens infectés par le HTLV présentaient une dermatite chronique. Les résultats microscopiques dans les échantillons prélevés dans les zones d’ichtyose confirmaient ce diagnostic. échantillons Pour confirmer le p résonance de HTLV- par l’expression de protéines virales dans la peau, des échantillons cutanés de sujets ont été utilisés dans les essais IF avec un anticorps monoclonal anti-p. Le test a permis d’identifier HTLV- dans certains échantillons, et donné PCR pour le gène HTLV- env. la peau en tant qu’étalon-or, la sensibilité et la spécificité du test IF indirect étaient des résultats en% faux négatifs des échantillons et en% aucun résultat positif des échantillons, respectivement

Discussion

L’absence d’autres facteurs de risque d’infection par le HTLV, en conjonction avec l’allaitement maternel pour% des cas, nous a permis de conclure que l’allaitement maternel était le seul facteur de risque de prédisposition génétique. Les observations précoces à Taïwan ont montré que la transmission de la mère à l’enfant est responsable de la majorité des cas d’infection par le HTLV survenant chez des parents , mais Dans un rapport, Kajiyma et al ont montré que ce mode de transmission représentait% des transmissions intramiliaires. Enfin, dans ~% des cas, l’infection fœtale peut être acquis par voie transplacentaire ou lors de l’accouchement Plusieurs lésions dermatologiques ont été retrouvées chez les sujets, notamment chez les sujets infectés par le HTLV. Des différences ont été observées entre les individus infectés et non infectés. En premier lieu, les lésions xérotiques ont été observées uniquement chez les porteurs HTLV. Dans l’ensemble, les patients ont présenté cette altération dermatologique, y compris les patients atteints d’ichtyose acquise. suggèrent que le HTLV- est capable d’envahir la peau. En outre, il renforce la relation probable entre HTLV-infection et dermatopathie, même chez les porteurs asymptomatiques L’ichtyose acquise peut être liée à plusieurs conditions cliniques, telles que les syndromes lymphoprolifératifs, l’hypothyroïdie, la sarcoïdose et Les lésions cutanées autres que la dermatite infectieuse peuvent être associées à une infection à HTLV, surtout chez les patients avec HAM / TSP ou ATLL . Récemment, Setoyama et al ont démontré Le HTLV peut infecter les cellules des glandes sudoripares Toutefois, ce virus peut également infecter les kératinocytes Il a été démontré que les kératinocytes activés par les cytokines libérées par les lymphocytes infectés par le HTLV sont des kératinocytes [H] / TSP et ichtyose Ce mécanisme ressemble à celui décrit dans d’autres affections associées au HTLV, telles que HAM / TSP et uvéite Tests de biologie moléculaire Approximativement% -% de PBMC sont infectés par HTLV- chez les patients avec HAM / TSP Ce pourcentage est encore plus élevé chez les patients ATLL est plus faible dans les transporteurs viraux sans symptômes PCR nested pour le gène HTLV-env effectué dans les PBMC des sujets a confirmé les tests sérologiques et le type de virus Comme mentionné, un patient avec charge provirale élevée a reçu un diagnostic de HAM / TSP ans après avoir Les patients ayant une charge virale élevée peuvent avoir un résultat clinique moins bon, ce qui nécessite une observation étroite. Enfin, la PCR pour le gène env réalisée sur la peau. Récemment, Gonçalves et al ont démontré que la fréquence des résultats de PCR positifs pour le HTLV- est significativement plus élevée dans des échantillons cutanés histologiquement anormaux. Dosage Le test IF réalisé sur des échantillons cutanés a montré une réaction modérée. sensibilité et haute spécificité pour l’identification HTLV Une découverte remarquable a été que la morphologie de toutes les cellules HTLV-positives ressemblait à celle des lymphocytes, bien que la localisation histologique précise dans la peau ne puisse être définie Comme mentionné plus haut, la présence accrue de lymphocytes pourrait expliquer en partie la lésion cutanée associée à l’infection par le HTLV Néanmoins, des études complémentaires, telles que les analyses des testicules libérant des cytokines, sont nécessaires pour confirmer cette hypothèse Les données présentées ici suggèrent un tropisme cutané du HTLV. Quelques limites Tout d’abord, l’absence de conception randomisée. De plus, nous n’avons pas pu effectuer les examens de laboratoire sur tous les sujets inclus, parce que les patients ont refusé de soumettre un deuxième frottis sanguin pour la PCR et, pour les patients, le matériel collecté était insuffisante Enfin, les patients vivant dans une zone rurale ont refusé de subir une biopsie cutanée. D’autre part, plusieurs avantages liés à une étude familiale peuvent être mentionnés, notamment l’homogénéité des facteurs génétiques et environnementaux pour les individus étudiés. On peut estimer la dynamique de la transmission intrafamilaire virale et ses conséquences. En conclusion, nos résultats renforcent la relation entre l’infection par HTLV et les lésions dermatologiques, principalement des troubles xérotiques de la peau. Ces lésions semblent également survenir chez des porteurs asymptomatiques de ce virus. étudier le mécanisme physiopathologique de ces résultats

Remerciements

Soutien financier Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits